一、簡(jiǎn)介
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒是酶免疫測(cè)定技術(shù)中應(yīng)用很廣的技術(shù)。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。
二、成分
試劑盒內(nèi)包括以下試劑：
1.酶標(biāo)板(96孔板)
2.血清檢測(cè)抗體試劑(固定在小板上)
3.特異性標(biāo)記兔抗人IgG辣根過氧化物酶(HRP)
4.HRP底物染色液
5.固定酶標(biāo)板的NaCI-Pi緩沖液
6.去污液
7.色譜純洗板緩沖液
三、樣本類型
本試劑盒可檢測(cè)不同種類的生物樣本，包括：血清、血漿、組織抽提物、陽性參考樣本、陰性對(duì)照樣本等。不過首先要保證樣本與試劑之間無相互干擾。
四、儲(chǔ)藏
應(yīng)于2-8℃的陰涼干燥處存放。如需長(zhǎng)期貯存，應(yīng)冷凍保存(-20℃或-80℃)。
五、試劑準(zhǔn)備
1.酶標(biāo)板制備：首先，在每個(gè)空白小孔板的每個(gè)孔中，添加50μL的PBS(0.01M)。然后將板放入一個(gè)旋轉(zhuǎn)式混合器中，溫和混合，管孔覆蓋在對(duì)應(yīng)的坑孔區(qū)域上，將坑孔以180度反轉(zhuǎn)，然后在抽走液體后，再次將坑孔埋入緩沖液中，丟棄PBS。最后，將板于坑孔中添加100µl的固定抗體，每個(gè)備件(坑孔)盡可能多添加固定抗體。
2.樣品制備：將樣品與樣品稀釋液按照比例混合。
3.銷量質(zhì)控制備：將陽性參考樣本與陰性對(duì)照樣本準(zhǔn)備好。
六、操作步驟
1.將酶標(biāo)板每個(gè)小孔內(nèi)填充50µL固定酶標(biāo)記性抗體時(shí)，將板制備至2-8℃下存儲(chǔ)20小時(shí)。
2.將液態(tài)樣品溶于樣品稀釋液中，使樣品達(dá)到適合檢測(cè)的濃度。樣品應(yīng)避免過度稀釋或過度濃縮。
3.然后，向每個(gè)小孔中加入50µl的稀釋后的樣品，以及50µl的陽性參考樣本、50µl的陰性對(duì)照樣本。
4.使用封板膜密封，并在37℃恒溫箱中孵化60分鐘。
5.丟棄所有的液體，并在試劑盒內(nèi)水龍頭下沖洗各個(gè)小孔以清除未被綁定的物質(zhì)。
6.將200υl洗板緩沖液加入每個(gè)小孔中，用廢液槽放置一段時(shí)間后，倒掉，重復(fù)此操作至少3次。
7.向每個(gè)小孔中加入50µl的HRP標(biāo)記羊抗人IgG，孵化37℃下30分鐘。
8.重復(fù)步驟6以清除未結(jié)合的物質(zhì)。
9.將50µl的HRP底物添加到每個(gè)小孔，并在黑暗中置于室溫靜止15分鐘。
10.停止反應(yīng)，加入50µl停止液應(yīng)用于每個(gè)孔中。
11.讀取OD值測(cè)量各小孔校準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本的質(zhì)量濃度。
七、注意事項(xiàng)
1.在開封后要存放于適當(dāng)?shù)谋４鏃l件下。
2.操作前檢查所有步驟的操作方法和準(zhǔn)備工作。
3.下一步操作前，須確保上一步的操作完成，并按照試劑盒內(nèi)的實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行。
4.空白對(duì)照、陽性對(duì)照和含待測(cè)物品的樣品需分別分管的水龍頭下漂洗小孔。
5.如需要測(cè)量微量的樣品，需使用微量孔板。
八、禁忌事項(xiàng)
1、本檢測(cè)盒內(nèi)禁止使用過期試劑。
2、禁止本試劑盒內(nèi)的試劑與其他試劑或活性物質(zhì)混合使用。
3、禁止口服或其他接觸本試劑盒內(nèi)的試劑。如發(fā)生皮膚敏感現(xiàn)象或可能影響人體內(nèi)部健康，應(yīng)進(jìn)行醫(yī)學(xué)干預(yù)。
九、適用范圍
本檢驗(yàn)盒被廣泛運(yùn)用于檢測(cè)各類疾病，如傳染病、自身免疫性疾病，腫瘤標(biāo)志物、突變基因等。
十、質(zhì)控
在正常操作中，該檢測(cè)盒可保證準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。如果使用中發(fā)現(xiàn)問題，請(qǐng)先嘗試實(shí)驗(yàn)操作流程，如仍然無法解決，可向生產(chǎn)廠家進(jìn)行垂詢。
以上就是對(duì)Elisa酶聯(lián)免疫試劑盒的說明書，希望各位用戶在使用本試劑盒時(shí)一定要加倍謹(jǐn)慎，按照說明書操作，以確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確無誤。
