豬圓環(huán)病毒抗體快速檢測卡?

實驗原理：豬圓環(huán)病毒抗體檢測試劑盒（膠體金法），系采用良好的膠體金免疫層析技術(shù)檢測樣本（全血、血清、血漿）中抗豬圓環(huán)病毒抗體的方法。整個試驗只需20分鐘，操作簡便、快速、準(zhǔn)確，靈敏度高、結(jié)果直觀、容易判定。本試劑盒內(nèi)還設(shè)計一張“金標(biāo)試紙與ELISA試驗實物參照圖”，用試紙檢測線的顏色與實物參照圖對照，便可粗略估計樣品中的抗體滴度。

【操作方法】

在檢測卡的加樣孔內(nèi)加入2滴（100ul）待檢血清或血液樣品。

將檢測卡平放于桌面上，在室溫下靜置20分鐘內(nèi)判定結(jié)果。超過20分鐘的結(jié)果只能作為參考。

【樣品處理】
1. 取一定量的去脂肪組織樣本，用剪刀剪碎；
2. 稱取 2g 剪碎樣本于 50 ml 離心管中，并加入 4ml 去離 子水， 0.5ml  1M  鹽酸 ， 0.1ml  樣 本衍生化試劑 1，,0.1ml 衍生化試劑 2，充分混合 3min；
3. 60℃水浴條件下孵育 1h；
4. 取出后加入 5ml 0.1M 磷酸氫二鉀，0.4ml 1M 氫氧化 鈉，倒入一瓶提取劑，充分混合 1min ，4000 轉(zhuǎn)/分鐘，離心 5min；
5. 移取上層溶液 3ml 于 5ml 離心管中，60℃下空氣吹 干；
6. 向吹干的試管中加入 1ml 凈化劑，加蓋振蕩 1min，然 后加入 0.5ml 復(fù)溶液，充分混勻，4000 轉(zhuǎn)/分鐘，離心1min（或靜置至明顯分層）；
7. 吸取 0.1 毫升下層溶液，待檢；
 

【使用步驟】 在進(jìn)行測試前先完整閱讀使用說明書，使用前將試劑板和待檢樣本溶液恢復(fù)至室溫（20℃~30℃）。
1.從原包裝袋中取出試劑板，水平放置于觀察者正面， 如上圖右側(cè)所示（打開后請立即使用）；
2.吸取待檢樣品溶液 100 微升于金標(biāo)微孔中，用小滴管 吹打*溶解孔內(nèi)紅色物質(zhì)，等待反應(yīng) 5 分鐘；
3.吸取孔內(nèi)所有溶液滴加到加樣孔（見上圖）中，加樣 后開始計時；
4. 結(jié)果應(yīng)在 5～8 分鐘讀取，其他時間判讀無效。
 

【結(jié)果判斷】
1. 陰性（－）： T 線顯色（檢測線，靠近加樣孔一端）比 C 線（對照線）深或一樣深，表示樣品中呋 喃它
酮代謝物濃度低于檢測限或不含呋喃它酮 代謝物。
2. 陽性（＋）： T 線顯色比 C 線淺，或 T 線無顯色，表示樣品中呋喃它酮代謝物殘留濃度高于檢測限，T 線顯色比 C 線越淺，表示樣品中呋喃它 酮代謝物殘留濃度越高。
3.無效：未出現(xiàn) C 線，可能是操作不當(dāng)或試劑板已失 效。應(yīng)再次閱讀說明書，并用新的試劑板重新 測試。代謝物濃度低于檢測限或不含呋喃它酮 代謝物。
4. 陽性（＋）： T 線顯色比 C 線淺，或 T 線無顯色，表示樣品中呋喃它酮代謝物殘留濃度高于檢測限，T 線顯色比 C 線越淺，表示樣品中呋喃它 酮代謝物殘留濃度越高。
5.無效：未出現(xiàn) C 線，可能是操作不當(dāng)或試劑板已失 效。應(yīng)再次閱讀說明書，并用新的試劑板重新測試。

組織檢測步驟：
  1、將樣本魚蝦蟹、畜禽肉、內(nèi)臟等去皮去脂肪,用均質(zhì)器均質(zhì)樣本，稱取3±0.05g均質(zhì)物至15ml離心管中。
  2、依次加入4ml蒸餾水、0.5ml試劑A和0.6ml衍生化試劑，振蕩混勻，在65℃水浴中孵育30min。
  3、依次加入1ml試劑B、0.4ml試劑C和1瓶提取劑（4ml），振蕩混勻。
  4、在室溫下（20-25℃）4000r/min離心5min，取2ml上層有機(jī)相至5ml離心管中，在50-60℃水浴中用氮?dú)猓ɑ蚬咎峁┑目諝獯蹈蓛x）吹干。
  5、取1ml凈化劑溶解干燥物，再加入0.5ml試劑D振蕩混勻，在室溫下（20-25℃）4000r/min離心2min，待檢。

?如使用全血標(biāo)本檢測，標(biāo)本的移動速度可能較慢，必要時可在加樣約1分鐘后，在加樣孔內(nèi)滴加1滴PBS作輔助液，以促進(jìn)標(biāo)本移動。

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